人阿黑皮素原（POMC）ELISA Kit

 　在ELISA實(shí)驗(yàn)前的注意事項(xiàng)

1       仔細(xì)閱讀說明書

2       確定試劑盒在有效期內(nèi)

3       按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）

4       標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存

5       準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等

6       根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量

7       按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑

DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南

8       選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。

9       ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。

10     標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

11     一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

12     為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。

13     若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

14     當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.

     每個試劑盒操作是不同的，請按說明書操作。具體事項(xiàng)請