96孔板血液DNAout(真空法)
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
96孔板血液DNAout(真空法) | 5次 | 6詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是基于離心柱/硅膠膜DNA吸附原理的、專門用于高通量、快速地從新鮮或冷凍的動(dòng)物(包括人和禽類)抗凝全血中提取基因組DNA的試劑,它具有下列特點(diǎn):
1. 一次可以同時(shí)處理96個(gè)樣品,每個(gè)樣品的體積在0.2-1 mL之間。
2. 產(chǎn)率高,一般為20-60 μg/mL全血(對(duì)哺乳動(dòng)物血液)。
3. DNA純凈,OD260/280在1.8-2.0之間。不含蛋白質(zhì)和RNA污染,可直接用于PCR、酶切、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
4. 操作簡(jiǎn)單,整個(gè)過程約20分鐘,全室溫操作,適合大規(guī)模樣品處理。
5. 安全無毒,本試劑盒不使用苯酚和,對(duì)人體無毒,無腐蝕性和刺激性氣味。
6. 本產(chǎn)品也可用于禽類血液等非哺乳動(dòng)物血液。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表:
RNase-Free Sodium Chloride Solution(無RNase的氯化鈉溶液),5M
RNase-Free SSC(無RNase的SSC),20X
RNase-Free SSPE(無RNase的SSPE),20X,pH7.4
RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),20X,pH7.4
RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),20X,pH7.6
RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),20X,pH8.0
RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),pH7.4
RNase-Free TE Buffer(無RNase的TE緩沖液),pH7.6