Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-) | 200U | 詢價(jià) |
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Klenow 片段（3´→5´exo-）是大腸桿菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解產(chǎn)物。它保留了DNA 聚合酶活性，但失去了 5´→3´ 外切核酸酶活性。該酶經(jīng)突變（D424A）去除了其 3´→5´ 的外切核酸酶活性。
具體有下列特點(diǎn)：
1. 用隨機(jī)引物制備探針
2. 隨機(jī)引物Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)標(biāo)記法
3. 合成 cDNA 第二鏈
4. 誘變反應(yīng)中第二鏈的合成
5. 雙脫氧法 DNA 序列測(cè)定（Sanger 法）
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
Klenow 片段 (3´→ 5´ exo-)相關(guān)產(chǎn)品列表：
人胰島淀粉樣多肽(IAPP)ELISA Kit
人胰島素(INS)ELISA Kit
人胰島素受體β(ISR-β)ELISA Kit
人胰島素受體底物2(IRS-2)ELISA Kit
人胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA Kit
人胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA Kit
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA Kit
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)ELISA Kit
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA Kit
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA Kit
人胰島素原(PI)ELISA Kit
人胰島素自身抗體(IAA)ELISA Kit
人胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA Kit
人胰淀粉酶(PAMY)ELISA Kit
人胰淀素(Amylin)ELISA Kit
人胰多肽(PP)ELISA Kit
人胰高血糖素(GC)ELISA Kit
人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA Kit
人胰激肽原酶(PK)ELISA Kit
人胰腺癌標(biāo)志物CA242ELISA Kit
人胰抑制素(PancReastatin)ELISA Kit
人乙胺碘呋酮(AD)ELISA Kit
人乙醇脫氫酶(ADH)ELISA Kit
人乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA Kit
人乙酰膽堿(ACH)ELISA Kit
人乙酰膽堿受體抗體(ACHRab)ELISA Kit
