熒光光度計紫外可見吸收光譜法是根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對紫外和可見光譜區(qū)輻射能的吸收來研究物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)的方法，而熒光分析法是由于處于一激發(fā)單重態(tài)低能級的分子以輻射躍遷的形成返回基態(tài)各振動能級時產(chǎn)生的熒光的分析方法，兩者的區(qū)別在于前者研究的是吸收光譜，且電子躍遷為激發(fā)態(tài)的振動能級到基態(tài)的振動能級間的躍遷。

熒光光度計

 光譜范圍:包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200～400 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙，黃綠，藍靛，紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。氫燈（或氘燈）的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源。

 物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r操作。

 核酸的定量是分光光度計使用頻率高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。