胞內(nèi)NADH / NADPH流式細(xì)胞分析試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測NADH/NADPH的試劑盒，細(xì)胞內(nèi)二氫煙酰an腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對于疾病診斷和發(fā)現(xiàn)是重要的。通常，氧化還原偶聯(lián)NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代謝，糖酵解，三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起關(guān)鍵作用。細(xì)胞中NAD（P）H水平的增加與活性氧（ROS）和DNA損傷的異常產(chǎn)生有關(guān)。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探針，在生物系統(tǒng)中檢測細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H具有挑戰(zhàn)性。該流式細(xì)胞分析試劑盒提供了一種監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H傳感器是一種的熒光探針，用于檢測和成像細(xì)胞中的NADH / NADPH。探針結(jié)合NADH / NADPH以產(chǎn)生具有高靈敏度和特異性的強(qiáng)熒光信號。 JZL1707 NAD（P）H傳感器可以很容易地加載到活細(xì)胞中，并且可以使用PE通道中的流式細(xì)胞儀方便地監(jiān)測其熒光信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的 胞內(nèi)NADH / NADPH流式細(xì)胞分析試劑盒。 

實驗示例

概述

1.準(zhǔn)備細(xì)胞（0.5-1×106細(xì)胞/ mL）
2.將細(xì)胞與測試化合物和JZL1707 NAD（P）H傳感器在37oC下孵育30-60分鐘
3.洗滌細(xì)胞并將其保存在測定緩沖液中
4.使用PE通道通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

操作步驟

1.對于每個樣品，在0.5 mL無血清培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中以1×105至1×106細(xì)胞/ mL的密度制備細(xì)胞。注意：應(yīng)單獨(dú)評估每個細(xì)胞系，以確定佳細(xì)胞密度。對于粘附細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并用無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。注意：JZL1707 NAD（P）H傳感器對血清敏感，因此建議將細(xì)胞保存在您選擇的無血清培養(yǎng)基或緩沖液中?；蛘?，可以制備細(xì)胞并在常規(guī)培養(yǎng)基中處理。與JZL1707 NAD（P）H Sensor孵育時，請更改為無血清培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液。
在37oC下將細(xì)胞與測試化合物一起孵育所需的時間，以刺激細(xì)胞內(nèi)的NADH / NADPH。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細(xì)胞類型和測試化合物。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。

2.將1 µL JZL1707 NAD（P）H傳感器（組分A）加入0.5 mL細(xì)胞懸液中。在37oC下孵育30-60分鐘。注意：對于NADH / NADPH陽性對照處理：將Jurkat細(xì)胞與100 µM NADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，然后與JZL1707 NAD（P）H Sensor工作溶液在37oC共同孵育30分鐘。分鐘。有關(guān)詳細(xì)信息，請參見圖1。

3.用所需的緩沖液洗滌細(xì)胞一次。將細(xì)胞保存在測定緩沖液（組分B）中。

4.使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測PE通道的熒光強(qiáng)度。