橙色熒光示蹤探針 CytoTrace CMTMR CytoTrace 橙色CMTMR在化學(xué)上與CellTracker 橙色CMTMR相同。CytoTrace Orange CMTMR可以自由地穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)化為不滲透細(xì)胞膜的反應(yīng)產(chǎn)物。CytoTrace Orange CMTMR染料可以在活細(xì)胞中保留數(shù)代。染料轉(zhuǎn)移到子細(xì)胞中，但不轉(zhuǎn)移到種群中的相鄰細(xì)胞中。CytoTrace 橙色CMTMR染料旨在顯示至少72小時的熒光，并且該染料具有理想的跟蹤特性。CMTMR染料穩(wěn)定，在工作濃度下無毒，在細(xì)胞中保留良好，并且在生理pH下發(fā)出明亮的熒光。此外，CytoTrace 橙色CMTMR染料的激發(fā)和發(fā)射光譜與GFP（綠色熒光蛋白）已很好地分離，并且可以進(jìn)行多重光譜。
橙色熒光示蹤探針 CytoTrace CMTMR
操作步驟
該協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。
1.準(zhǔn)備2-10 mMDMSO儲備溶液
對于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的儲備溶液（1毫克/毫升，相當(dāng)于1.8毫摩爾）;
對于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM儲備溶液（1毫克/毫升，相當(dāng)于1.46毫摩爾）;
對于＃22016，添加153 uL ml DMSO以制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當(dāng)于1.53 mM）；
對于＃22017，添加215μLDMSO以制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當(dāng)于2.15 mM）;
對于＃22020，將4.2 mg溶于1 ml DMSO中制成10 mM儲備溶液（1 mg / ml相當(dāng)于?2.4 mM）；
注意：儲備溶液應(yīng)及時使用；應(yīng)將所有剩余的溶液等分并在< -20 o C下冷凍。避免重復(fù)凍融循環(huán)，并避光
2.準(zhǔn)備染料工作液
在使用前，通過用Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的pH 7緩沖液稀釋步驟1中的DMSO儲備溶液，準(zhǔn)備好1至20 µM的染料工作溶液。
3.用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞：
3.1用測試化合物處理細(xì)胞所需的時間。
3.2離心細(xì)胞，每管得到2-10 x105細(xì)胞。
3.3將細(xì)胞重懸于500 µL 的染料工作溶液中（來自步驟2）。
3.4將細(xì)胞與染料溶液在室溫或37° C下避光放置15至30分鐘。
3.5從細(xì)胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于500 µL預(yù)熱的HHBS或培養(yǎng)基中，每管可得到2-10 x 10 5個細(xì)胞。
3.6用流式細(xì)胞儀（FL1通道） 或熒光顯微鏡監(jiān)測Ex / Em = 490/520 nm處的熒光變化。
注意：對于細(xì)菌細(xì)胞染色：將母液在通過測試細(xì)菌過夜生長而預(yù)先調(diào)節(jié)的營養(yǎng)肉湯中以1：800的比例稀釋時，染色是有效的，但是也可以使用新鮮的營養(yǎng)肉湯或PBS。細(xì)菌懸浮液應(yīng)用PBS稀釋至105 - 10 7每毫升。將1 ml溶液加到.45 µm過濾器（25mm）上并真空過濾除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室溫下孵育5-10分鐘，即可對細(xì)菌染色。
