MTT細胞增殖檢測試劑盒

 MTT Cell Proliferation Assay 

貨號 規(guī)格 BDXB0004 100次 

保存：4℃避光保存，保質期1年 

 MTT Cell Proliferation Assay 產品概述

    MTT全稱為3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，漢語化學 名為3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍，是一種黃顏色的染 料。 活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢 （Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的 甲臢，用酶標儀在500-600nm波長處測定其光吸收值，在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成 的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值（OD值）來判斷活細胞數量，OD值越大，細胞 活性越強（如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?。

   MTT法已經廣泛應用于一些生物 活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等領域，它的特點是敏感度高、成本低廉。它的缺點是需要使用有機溶劑，不僅是工作量增加， 也會對實驗準確性產生影響。 

 MTT 細胞增殖檢測試劑盒組成

 1. MTT試劑：10ml 

2. 甲臢溶解液：100ml 

需要自己準備的材料

 1. PBS（無菌）

 2. 細胞培養(yǎng)基（無菌）

 3. 96孔板（組織培養(yǎng)級，平底，無菌） 

4. 倒置顯微鏡 

5. 排槍 

6. 細胞CO2培養(yǎng)箱 

7. 酶標儀（含650、570nm濾光片）

 使用方法 

1. 根據實驗目的取不同數量的細胞進行96孔板的鋪板（參考值：細胞增殖實驗每孔加入 100μl約2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100μl約5000個細胞。如有可能，先做 預實驗，確定細胞鋪板的數量）。

 2. 待細胞貼壁、生長恢復后，按照實驗需要，給予不同濃度的藥物刺激等處理。

 3. 每孔加入10μl的MTT試劑。（如果細胞培養(yǎng)基體積大于100μl，按比例調整加入MTT試 劑的量）

 4. 37℃孵育2-4hr。間或用顯微鏡觀察細胞內沉淀形成情況。

 5. 當顯微鏡下能看到明顯的紫色結晶沉淀時，每孔加入100μl甲臢溶解液（包括對照孔）。 勿晃動。

 6. 室溫（18-24℃）避光放置至少2hr（最長可以過夜）。如果讀數偏低，并且紫色結晶溶 解不，可以繼續(xù)放置。（通常室溫放置就足夠，但37℃有助于加速結晶的溶解）

 7. 去蓋，將孔板放到酶標儀中，在570nm（或介于550-600nm間的任意波長）測定OD值， 參比波長650nm。

 MTT 細胞增殖檢測試劑盒 注意事項 

1. 實驗中必須設立陰性對照。 空白孔的OD值應該在0±0.1之間 未處理細胞的OD值通常應該在0.75-1.25之間

 2. 陽性對照也應該設

立。