一、方法原理簡(jiǎn)介
標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：國(guó)家《中華人民共和國(guó)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749-2006）中增加了賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)的微生物指標(biāo)，要求為<1個(gè)/10L。該產(chǎn)品運(yùn)用的檢測(cè)方法是國(guó)標(biāo)規(guī)定的“兩蟲(chóng)”IFA 檢測(cè)方法，采樣淘洗及 IMS 系統(tǒng)均符合國(guó)標(biāo)及美國(guó) EPA1623 的標(biāo)準(zhǔn)方法。
具體步驟如下：過(guò)濾采樣→淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→顯微鏡檢
二、主要特點(diǎn)及技術(shù)*性說(shuō)明
（一）、兩蟲(chóng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)性、合理性、適用性
1、 美國(guó)UniBest公司Compact 型兩蟲(chóng)檢測(cè)儀 IFA 染色系統(tǒng)符合并優(yōu)于中國(guó)國(guó)標(biāo)。
2、 美國(guó)UniBest公司Compact 型兩蟲(chóng)檢測(cè)儀 IMS 免疫磁分離系統(tǒng)采用國(guó)標(biāo) GB/T 5750.12-2006 方法。
3、 美國(guó)UniBest公司Compact 型兩蟲(chóng)檢測(cè)儀過(guò)濾系統(tǒng)采用符合國(guó)際技術(shù)規(guī)范規(guī)定的一次性濾囊。
（二）、兩蟲(chóng)系統(tǒng)的可靠性、穩(wěn)定性
1、 過(guò)濾步驟回收率 ≥99%
2、 淘洗步驟回收率 ≥80%
3、 IMS 免疫磁分離步驟回收率 ≥90%
4、 總回收率（過(guò)濾、淘洗、磁珠分離、染色）≥ 35%
5、 檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差 ≤10%
6、 鏡檢率：賈第鞭毛蟲(chóng)孢囊 99%檢出，隱孢子蟲(chóng)卵囊 99%檢出
7、 檢測(cè)可處理高濁度水樣：可達(dá) 100（NTU）
8、 試劑盒配備預(yù)制的陽(yáng)性對(duì)照玻片，確保試劑盒的有效活性；避免誤檢，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
9、 保質(zhì)期長(zhǎng)：美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司 ClearScan 系列兩蟲(chóng) IFA 染色試劑保質(zhì)期長(zhǎng)達(dá) 24 個(gè)月，是業(yè)內(nèi)保質(zhì)期更長(zhǎng)、性能更穩(wěn)定的 IFA 試劑。
（三）、兩蟲(chóng)系統(tǒng)的*性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性
1、 標(biāo)記單克隆抗體：包括抗隱孢子蟲(chóng)抗體和抗賈第鞭毛蟲(chóng)單克隆抗體的異硫氰酸熒光素（FITC），系一種的免疫球蛋白M五聚體，由5 個(gè)FITC結(jié)合點(diǎn)位同時(shí)標(biāo)記一個(gè)抗體，具有顯著的明亮熒光效果，該抗體是國(guó)標(biāo)推薦的染色試劑。
2、 提供固色液：固色液使顯色更穩(wěn)定，幾天后仍不褪色鏡檢效果依然清晰。
3、 美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司 ClearScan 系列 IFA 染色試劑已添加專用復(fù)染液，可使聚焦更準(zhǔn)確，計(jì)數(shù)更清晰準(zhǔn)確。
4、 提供陽(yáng)性對(duì)照玻片：試劑盒（25 次測(cè)試量）中含一個(gè)預(yù)制的載玻片供時(shí)時(shí)自檢，使測(cè)試更便捷更省時(shí)。
5、 采樣過(guò)濾系統(tǒng)采用美國(guó) EPA1623 標(biāo)準(zhǔn)推薦的一次性濾囊，杜絕樣品交叉污染；可以在不更改所有實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及器具的情況下替代其它品牌的一次性或多次使用的過(guò)濾器具。
6、 美國(guó) UniBest 公司 ClearScan 系列兩蟲(chóng)檢測(cè)系統(tǒng)，日常檢測(cè)運(yùn)行成本與市場(chǎng)同類產(chǎn)品相比具有明顯優(yōu)勢(shì)。
三、系統(tǒng)概述
（一）、采樣淘洗濃縮系統(tǒng)
采用符合中國(guó)國(guó)標(biāo)及美國(guó) EPA 要求的囊式過(guò)濾器對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，將孢囊、卵囊及其他物質(zhì)收集在過(guò)濾器上，該過(guò)濾器可用于實(shí)驗(yàn)室及野外現(xiàn)場(chǎng)水樣過(guò)濾。濾囊利用兩蟲(chóng)專用淘洗緩沖液將攔截在濾囊上的兩蟲(chóng)振蕩洗脫下來(lái)，最后進(jìn)行離心收集。
（二）、免疫磁分離系統(tǒng)（IMS）
IMS 過(guò)程使用美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司的 ClearScan 系列兩蟲(chóng)專用免疫磁分離試劑盒，利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)特異性抗原相結(jié)合，在磁場(chǎng)中高效選擇性分離，該步驟可保證檢測(cè)的特異性。
（三）、IFA（間接免疫熒光）染色系統(tǒng)
使用美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司的 Cellabs 型檢測(cè)賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)診斷專用試劑盒（內(nèi)含的免疫球蛋白 M 五聚體 FITC 單克隆抗體）對(duì)水樣中的兩蟲(chóng)（抗原）進(jìn)行熒光標(biāo)記，同時(shí)利用細(xì)胞核染色劑 DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）與細(xì)胞核中的雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)出熒光，排除假陽(yáng)性反應(yīng)，從而提高鏡檢準(zhǔn)確性。
（四）、顯微鏡檢系統(tǒng)
使用兩蟲(chóng)專用熒光顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè)，觀察樣本，對(duì)符合孢囊和卵囊大小、外形、熒光特性的被觀察物依據(jù)國(guó)標(biāo) GB/T 5750.12-2006 中賈第鞭毛蟲(chóng)孢囊與隱孢子蟲(chóng)卵囊的特征（見(jiàn)尾頁(yè)）進(jìn)行定性、定量分析。
四、技術(shù)參數(shù)
| 系統(tǒng) | 設(shè)備 | 主要性能技術(shù)標(biāo) | 設(shè)備的應(yīng)用和特點(diǎn) |
| 過(guò)濾采樣及淘洗濃縮系統(tǒng) | UniBest 公司囊式過(guò)濾器 | 1、 此方法比其他方法更快更簡(jiǎn)單，可以對(duì)多樣個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行處理； 2、 一次性的設(shè)計(jì)杜絕交叉污染，避免造成假陽(yáng)性誤判 3、 囊式濾器采用特制的0.45μm孔徑的改良濾膜能99%截留兩蟲(chóng)，排除了假陰性。 | 該方法符合中國(guó)國(guó)標(biāo) GB5750.12-2006 及美國(guó) EPA 兩蟲(chóng)過(guò)濾采樣方法；專用于水源水與自來(lái)水的隱孢子蟲(chóng)及賈第鞭毛蟲(chóng)的濃縮與回收；使用簡(jiǎn)單，濾器無(wú)需安裝和清洗。 |
| UniBest 公司洗脫振蕩器 | 1、 電源：230V 50HZ 50W 2、 工作振幅：1.5mm 3、 速度范圍：0-1000 振幅/分鐘 4、 上限載重：3kg 5、 凈重：8kg | 該產(chǎn)品可同時(shí)洗脫 12 個(gè)樣品，有效地節(jié)省了大量的人力及樣品前處理時(shí)間。 | |
| 專用蠕動(dòng)泵 | 1、 適用電源：AC220V/50Hz 2、 消耗功率：<140W 3、 流量范圍：0.7-6000ml/min 4、 轉(zhuǎn)速 10-600rpm 5、 液晶顯示屏 6、 工作環(huán)境：環(huán)境溫度 0~40°C，相對(duì)濕度<80% | 專用蠕動(dòng)泵因水樣只接觸泵管，維護(hù)清洗簡(jiǎn)單?？蛇x雙通道，同時(shí)采樣兩個(gè)樣品。 | |
| 專用離心機(jī) | 1、 適配器：4x250ml 2、 上限轉(zhuǎn)速：5300rpm 3、 定時(shí)范圍：0-99min 4、 電源：AC220V 50Hz 20A 5、 相對(duì)大離心力：5000g（注：g 為重力加速度） 6、 噪聲（上限轉(zhuǎn)速）： ≤ 60Db(A) 7、 凈重：30kg | 的安全保護(hù)設(shè)計(jì)： 1、 超速停止、門(mén)蓋自鎖、誤操作保護(hù) 2、 緊急情況開(kāi)門(mén) 3、 防爆門(mén)蓋 4、 蜂鳴器報(bào)警系統(tǒng) 5、 具有 10個(gè)程序升降速率曲線 |
五、備注
按照國(guó)標(biāo) GB 5750 12-2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》規(guī)定，“兩蟲(chóng)”檢測(cè)系統(tǒng)大致分為以下五個(gè)步驟，分別是：過(guò)濾采樣→ 淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→ 顯微鏡檢，其中過(guò)濾采樣僅僅是“兩蟲(chóng)”檢測(cè)環(huán)節(jié)中的一個(gè)非核心步驟，實(shí)驗(yàn)方法中所提到的過(guò)濾器的型號(hào)并不能斷章取義地代表兩蟲(chóng)檢測(cè)的采樣方法實(shí)質(zhì)，更不能以偏概全地代表兩蟲(chóng)檢測(cè)全過(guò)程的檢測(cè)方法；過(guò)濾采樣器只是收集樣品的工具，而并非兩蟲(chóng)檢測(cè)的關(guān)鍵技術(shù)，并且隨著兩蟲(chóng)采樣技術(shù)的進(jìn)步，只要使用的兩蟲(chóng)采樣器達(dá)到樣本采集的目的即可；如果僅僅用一個(gè)過(guò)濾采樣器的型號(hào)來(lái)自稱是國(guó)標(biāo)甚至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方法，就會(huì)混淆了兩蟲(chóng)檢測(cè)方法以及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的本來(lái)實(shí)質(zhì)。
美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)集團(tuán)的“兩蟲(chóng)”檢測(cè)系統(tǒng)，采用的是一次性濾囊的過(guò)濾采樣方法，且性能指標(biāo)不僅滿足而且優(yōu)于國(guó)標(biāo)（國(guó)標(biāo)要求濾囊的孔徑為 1μm，我們的孔徑為0.45μm，更小的孔徑，更, 能, , , 保證兩蟲(chóng)的 99%截留, ）。
“兩蟲(chóng)”檢測(cè)的核心步驟在于 IFA（間接免疫熒光）染色，美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)集團(tuán)“兩蟲(chóng)”染色試劑是國(guó)標(biāo)核心步驟的染色試劑。
