Thermo Scientific LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒為利用電泳遷移率變動(dòng)實(shí)驗(yàn) (EMSA) 研究 RNA 蛋白相互作用提供了一種無放射性解決方案。
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒的特點(diǎn)：
?靈敏 — 化學(xué)發(fā)光檢測與放射性檢測相當(dāng)
?節(jié)省時(shí)間 — 與放射性系統(tǒng)所需的 16 小時(shí)曝光相比，X 射線膠片在曝光 1 至 5 分鐘后即可顯影
?靈活 — 兼容通過不同方法化的 RNA 探針
?易于使用 — 全套試劑盒包括用于結(jié)合反應(yīng)和 RNA 探針檢測的優(yōu)化試劑
?無放射性 — 不存在放射性 RNA 探針?biāo)哂械膹U棄物問題
RNA EMSA 試劑盒使用化 RNA 探針和化學(xué)發(fā)光底物系統(tǒng)，可快速且安全地檢測 RNA-蛋白復(fù)合物，靈敏度與傳統(tǒng) 32P-同位素方法相當(dāng)。全套試劑盒包含構(gòu)建和優(yōu)化蛋白-RNA 結(jié)合條件所需的全部試劑、用于蛋白-RNA 相互作用的陽性對(duì)照及核酸相互作用化學(xué)發(fā)光檢測的全部試劑。
關(guān)于 LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒是通過與常用 DNA 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)相似的凝膠電泳遷移模式的變化檢測蛋白-RNA 相互作用的體外技術(shù)。在 RNA EMSA 中，將標(biāo)記的 RNA 探針與蛋白樣品一起孵育，以開始結(jié)合。形成復(fù)合物后，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品。因?yàn)?RNA-蛋白復(fù)合物的遷移速度比游離 RNA 探針慢，所以使用 RNA 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)可以觀察到遷移距離。通過與過量未標(biāo)記 RNA 結(jié)合競爭以減少特異性相互作用信號(hào)，驗(yàn)證了 RNA-蛋白相互作用的特異性。一般來說，突變或不相關(guān) RNA 探針預(yù)計(jì)不會(huì)因特異性相互作用而競爭，在 EMSA 中檢測時(shí)特定條帶遷移的強(qiáng)度不應(yīng)降低。完整的 LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒包含設(shè)置和優(yōu)化 RNA 凝膠遷移分析所需的所有試劑，包括 RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物形成的陽性對(duì)照。
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒使用化 RNA 探針、辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素和化學(xué)發(fā)光檢測，以提供與使用放射性 RNA 探針時(shí)相似的靈敏度，但檢測速度更快。標(biāo)記的 RNA 探針可以在市場上購買或通過使用化核苷酸進(jìn)行失控體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)生成或通過使用 Thermo Scientific Pierce RNA 3' 末端化試劑盒將標(biāo)記酶促連接至 RNA 鏈的 3' 末端生成。LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒對(duì)于通過這三種方法中的任何一種進(jìn)行化的 RNA 探針都有效；然而，在失控體外轉(zhuǎn)錄 RNA 探針合成期間，RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)可能會(huì)受到化核苷酸的內(nèi)部摻入的影響。因此，對(duì)于某些相互作用，可能需要定制的合成 RNA 探針或 3' 末端化探針才能實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)牡鞍?RNA 相互作用。
關(guān)于 LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒的陽性對(duì)照品
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒中包括的陽性對(duì)照品是鐵反應(yīng)元件 (IRE) RNA 探針。IRE 結(jié)合反應(yīng)與其他實(shí)驗(yàn)樣品同時(shí)進(jìn)行設(shè)置和檢測。在缺鐵條件下，鐵反應(yīng)蛋白 (IRP) 仍與細(xì)胞中存在的 IRE RNA 結(jié)合，有效抑制鐵蛋白（鐵存儲(chǔ)蛋白）的翻譯，然后抑制轉(zhuǎn)鐵蛋白受體。在富鐵條件下，IRE 結(jié)合活性喪失，進(jìn)行鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白翻譯。該系統(tǒng)普遍存在，并可產(chǎn)生穩(wěn)健的條帶遷移。用 200 倍摩爾過量未標(biāo)記 IRE RNA 孵育陽性對(duì)照反應(yīng)將使特異性 IRE 條帶遷移信號(hào)減少約 70%，而相似倍數(shù)過量的無關(guān) RNA 探針將不會(huì)使 IRE 條帶遷移顯著減少。這些對(duì)照品可用于各 RNA 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證蛋白-RNA 復(fù)合物形成的正確設(shè)置、電泳、轉(zhuǎn)移和檢測。
相關(guān)產(chǎn)品
用于 LightShift™ 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒的 tRNA
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒的特點(diǎn)：
?靈敏 — 化學(xué)發(fā)光檢測與放射性檢測相當(dāng)
?節(jié)省時(shí)間 — 與放射性系統(tǒng)所需的 16 小時(shí)曝光相比，X 射線膠片在曝光 1 至 5 分鐘后即可顯影
?靈活 — 兼容通過不同方法化的 RNA 探針
?易于使用 — 全套試劑盒包括用于結(jié)合反應(yīng)和 RNA 探針檢測的優(yōu)化試劑
?無放射性 — 不存在放射性 RNA 探針?biāo)哂械膹U棄物問題
RNA EMSA 試劑盒使用化 RNA 探針和化學(xué)發(fā)光底物系統(tǒng)，可快速且安全地檢測 RNA-蛋白復(fù)合物，靈敏度與傳統(tǒng) 32P-同位素方法相當(dāng)。全套試劑盒包含構(gòu)建和優(yōu)化蛋白-RNA 結(jié)合條件所需的全部試劑、用于蛋白-RNA 相互作用的陽性對(duì)照及核酸相互作用化學(xué)發(fā)光檢測的全部試劑。
關(guān)于 LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒是通過與常用 DNA 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)相似的凝膠電泳遷移模式的變化檢測蛋白-RNA 相互作用的體外技術(shù)。在 RNA EMSA 中，將標(biāo)記的 RNA 探針與蛋白樣品一起孵育，以開始結(jié)合。形成復(fù)合物后，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品。因?yàn)?RNA-蛋白復(fù)合物的遷移速度比游離 RNA 探針慢，所以使用 RNA 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)可以觀察到遷移距離。通過與過量未標(biāo)記 RNA 結(jié)合競爭以減少特異性相互作用信號(hào)，驗(yàn)證了 RNA-蛋白相互作用的特異性。一般來說，突變或不相關(guān) RNA 探針預(yù)計(jì)不會(huì)因特異性相互作用而競爭，在 EMSA 中檢測時(shí)特定條帶遷移的強(qiáng)度不應(yīng)降低。完整的 LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒包含設(shè)置和優(yōu)化 RNA 凝膠遷移分析所需的所有試劑，包括 RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物形成的陽性對(duì)照。
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒使用化 RNA 探針、辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素和化學(xué)發(fā)光檢測，以提供與使用放射性 RNA 探針時(shí)相似的靈敏度，但檢測速度更快。標(biāo)記的 RNA 探針可以在市場上購買或通過使用化核苷酸進(jìn)行失控體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)生成或通過使用 Thermo Scientific Pierce RNA 3' 末端化試劑盒將標(biāo)記酶促連接至 RNA 鏈的 3' 末端生成。LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒對(duì)于通過這三種方法中的任何一種進(jìn)行化的 RNA 探針都有效；然而，在失控體外轉(zhuǎn)錄 RNA 探針合成期間，RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)可能會(huì)受到化核苷酸的內(nèi)部摻入的影響。因此，對(duì)于某些相互作用，可能需要定制的合成 RNA 探針或 3' 末端化探針才能實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)牡鞍?RNA 相互作用。
關(guān)于 LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒的陽性對(duì)照品
LightShift 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒中包括的陽性對(duì)照品是鐵反應(yīng)元件 (IRE) RNA 探針。IRE 結(jié)合反應(yīng)與其他實(shí)驗(yàn)樣品同時(shí)進(jìn)行設(shè)置和檢測。在缺鐵條件下，鐵反應(yīng)蛋白 (IRP) 仍與細(xì)胞中存在的 IRE RNA 結(jié)合，有效抑制鐵蛋白（鐵存儲(chǔ)蛋白）的翻譯，然后抑制轉(zhuǎn)鐵蛋白受體。在富鐵條件下，IRE 結(jié)合活性喪失，進(jìn)行鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白翻譯。該系統(tǒng)普遍存在，并可產(chǎn)生穩(wěn)健的條帶遷移。用 200 倍摩爾過量未標(biāo)記 IRE RNA 孵育陽性對(duì)照反應(yīng)將使特異性 IRE 條帶遷移信號(hào)減少約 70%，而相似倍數(shù)過量的無關(guān) RNA 探針將不會(huì)使 IRE 條帶遷移顯著減少。這些對(duì)照品可用于各 RNA 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證蛋白-RNA 復(fù)合物形成的正確設(shè)置、電泳、轉(zhuǎn)移和檢測。
相關(guān)產(chǎn)品
用于 LightShift™ 化學(xué)發(fā)光 RNA EMSA 試劑盒的 tRNA
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
