產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：AbFluor• 555-Phalloidin
產(chǎn)品中文名稱：AbFluor• 555-鬼筆環(huán)肽
規(guī)格：500 T
貨號：EY-01X8574
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• 優(yōu)化的實驗方案，特別適用于甲醛固定與透化處理的組織切片、細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗中的F-actins標記，鑒定以及定量需求。
• 的AbFluor• 555-鬼筆環(huán)肽 (橙色熒光) (Ex/Em = 555/565 nm)，特異性地結(jié)合F-actins，且兼具比其它熒光素-鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物更強的光穩(wěn)定性。
產(chǎn)品形式凍干粉產(chǎn)品
使用中注意事項鬼筆環(huán)肽為有毒物質(zhì)，請小心處理。
保存建議:-20℃，避光保存12個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
鬼筆環(huán)肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來的一種多肽物質(zhì)，屬于毒傘肽類毒素，是一種強烈毒素。它是一種特異性結(jié)合F-肌動蛋白的雙環(huán)肽，因此，使用熒光染料偶聯(lián)的鬼筆環(huán)肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，半和之間存在不尋常的硫醚橋，可形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。當pH升高時，硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽喪失對肌動蛋白的親和力。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC 0.5mgAkt/PKC(Protein Kinase C,PKC) 蛋白激酶C(多肽抗原)
CD46 Protein Human 重組人 CD46 蛋白
FCGR3重組小鼠 CD16 / FCGR3 蛋白 Protein
CD79B Protein Rat 重組大鼠 CD79B / B29 蛋白 (Fc 標簽)
CD1B重組人 CD1B / CD1A 蛋白 (Fc 標簽) Protein
小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human kaliuretic peptide (KP) ELISA Kit 人利尿肽(KP)檢測試劑盒
HumanAcrineOrange,AOELISAKit 人橙(AO)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
bullfroggrowthhormone,GH檢測試劑盒牛蛙生長激素(GH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
魚類受精卵細胞凍存試劑盒(超低溫)50次
MouseInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠氧化型高密度脂蛋白(ox-HDL）檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)檢測試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠血管非性蛋白1(VNN1)檢測試劑盒 ，英文名： VNN1 ELISA Kit
Plas of 25 hydroxy vitamin D3 (25 (OH) ELISA kit D3/25 HVD3) ELISA kit E 植物25羥基3(25(OH)檢測試劑盒D3/25 HVD3)檢測試劑盒E
MousePlateletFactor4,PF-4ELISAKit 小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanapelin12,AP12ELISAKit人apelin12
細胞ERK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitMCP-2/CCL8大鼠單核細胞趨化蛋白2
AbFluor• 555-鬼筆環(huán)肽IgG3重組小鼠 IgG3-Fc 蛋白 Protein
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)重組蛋白 Recombinant Surfactant Associated Protein J (SPJ)
CARHSP1重組人 CARHSP1 蛋白 Protein
CD46 Protein Human 重組人 CD46 蛋白
EDAR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EDAR 蛋白
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
