BL21 (DE3) pLysS Competent Cell
大腸桿菌感受態(tài)細胞
產品標簽：
BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Kanamycin（kan）卡那mei素；Carbenicillin 羧芐青mei素；In-fusion 一步法克隆檢測試劑盒；
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貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2332-1000UL | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 450 |
MF2332-5000UL | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1880 |
產品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2332-1000UL | MF2332-5000UL | ||
MF2332-A | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2332-B | Control Plasmid puC19, 0.1ng/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質粒pLysS，具有氯mei素抗性。pLysS含有表達T7溶jun酶的基因，T7溶jun 酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，從而能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶）。
BL21 (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr
產品描述
本品是大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率可達107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，六個月有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1）感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2）最好在冰上融化感受態(tài)細胞。
3）進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。
4）為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。
5）產品包裝內含質粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供對照實驗用。
6）BL21(DE3)pLysS菌株攜帶質粒pLysS，除復蘇培養(yǎng)基不含抗生素外，其余所用培養(yǎng)基/培養(yǎng)液均應含34μg/ml氯mei素，以防止質粒丟失。
7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】
1）取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管內，置于冰浴中。【注意：一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一?！?/span>以下實驗以50 μl感受態(tài)細胞為例。
2）向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴靜置30min。
3）42℃熱擊45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。
4）向每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5）根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收， 倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
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MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade 利fu平 | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。
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