【試劑介紹】
Mag-Fura-2 AM,Cell Permeant 熒光探針,是一種胞內(nèi)鎂離子指示劑,屬于紫外激發(fā)的比率型探針,與鎂離子結(jié)合的Kd值為1.9mM。激發(fā)波長(zhǎng)歷經(jīng)藍(lán)色遷移從369nm到330nm。
Mag-Fura-2 AM,Cell Permeant 熒光探針具細(xì)胞膜滲透性,只需簡(jiǎn)單孵育,即可加載進(jìn)入細(xì)胞。
【技術(shù)參數(shù)】
CAS:130100-20-8
分子式:C30H30N2O19
分子量:722.56g/mol
Ex/Em:336/503 nm
溶解性:溶于DMSO
狀態(tài):黃色固體
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
化學(xué)結(jié)構(gòu)式:
【使用方法】
儲(chǔ)存液制備
取一管低溫保存的Mag-Fura-2 AM,,置于室溫回溫20min。之后加入無(wú)水DMSO配制成1~5mM儲(chǔ)存液,比如50μgMag-Fura-2 AM溶于13.8μl DMSO,溶解后即得到5mM儲(chǔ)存液。
注意:未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃,避免反復(fù)凍融,且要避光保存。盡快使用完。
【操作步驟】
(1)在所需溫度(25℃~37℃)預(yù)孵育細(xì)胞10min,使其離子梯度達(dá)到穩(wěn)定和平衡。
(2)取4μl Mag-Fura-2 AM儲(chǔ)存液和5μl 20% Pluronic®F-127,加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)液,劇烈漩渦混勻得到均勻的探針?lè)稚⒁骸?/span>
(3) 取250μl上述制備的探針?lè)稚⒁杭尤?50μl含細(xì)胞的培養(yǎng)基內(nèi)混勻,此時(shí)得到終濃度為1~5μM的工作液,根據(jù)起始母液濃度來(lái)確定。
(4)根據(jù)需求探針?lè)跤?5~60min。
(5)細(xì)胞清洗3次,之后繼續(xù)孵育30min以保證細(xì)胞內(nèi)的探針去酯化。之后選擇儀器進(jìn)行熒光測(cè)定。
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本試劑僅供科研使用!
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