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技術文章

重組酶聚合酶擴增

閱讀:3507發(fā)布時間:2014-11-6

重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(由英國公司TwistDx Inc開發(fā))。以此為基礎的TwistAmp® 核酸擴增產(chǎn)品,能夠在15分鐘內(nèi)進行常溫下的單分子核酸檢測。該技術對硬件設備的要求很低,特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領域。

RPA檢測瘧原蟲

核酸擴增是目前zui靈敏的瘧原蟲(P. falciparum)特異性檢測法。然而,PCR需要熱循環(huán)設備和專業(yè)性操作,資源匱乏的地區(qū)往往難以滿足這些條件。在這種情況下,與側(cè)流層析結(jié)合的RPA有著很大的應用前景。

Malaria Journal》雜志今年三月份發(fā)表的一項研究中,研究人員將RPA基礎反應、TwistAmp nfo探針和側(cè)流層析結(jié)合起來,實現(xiàn)了瘧原蟲18S rRNA基因的高靈敏度快速檢測。在38°C的條件下需要不到十分鐘的擴增,就能檢出含有四個瘧原蟲的樣本。加上側(cè)流層析的檢測時間,整個流程總共只需要15分鐘,而且肉眼可以直接看到檢測結(jié)果。

研究人員用不同瘧原蟲測試了這種方法的靈敏度和特異性。研究顯示,所有瘧原蟲都被成功檢出,所有非瘧原蟲都得出了陰性結(jié)果。文章指出,這一方案將大大改善資源匱乏地區(qū)的瘧原蟲分子診斷。(參考文獻:Rapid detection of Plasmodium falciparum with isothermal recombinase polymerase amplification and lateral flow analysis

RPA檢測冠狀病毒

2012年在中東鑒定的中東呼吸綜合癥冠狀病毒( Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是一種新型的冠狀病毒。這種病毒很快傳入了歐洲,給公共安全機構敲響了警鐘。

目前,MERS-CoV檢測主要依賴于實時RT-PCR,需要收集患者樣本然后到專門的實驗室去檢驗。因此,亟需能夠進行實地檢測的快速裝置。

PLOS CurrentsOutbreaks》去年十二月發(fā)表的一項研究,開發(fā)了一個能在3-7分鐘內(nèi)鑒定MERS-CoV的便攜式RT-RPA裝置。在42°C條件下,等溫MERS-CoV RT-RPA與實時RT-PCR一樣敏感,可檢出10RNA分子。文章指出,這個便攜裝置是監(jiān)控MERS-CoV傳播,尋找其動物宿主的理想方法。(參考文獻:Reverse Transcription Recombinase Polymerase Amplification Assay for the Detection of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus

除此之外,世界各地的研究者們近期還用RPA技術檢測了許多其他的病毒。比如南美對蝦濃核癥病毒、對蝦白斑綜合癥病毒、李痘病毒、櫻桃小果病毒2、黃熱病毒、牛冠狀病毒、施馬倫貝格病毒、牛病毒性腹瀉病毒、口蹄疫病毒等等。RPA甚至還被用來直接檢驗尿液中的沙眼衣原體


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