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上海哈靈生物科技有限公司
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細(xì)菌總ATP酶活性酶連續(xù)反應(yīng)光譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
2017-11-27 閱讀(1062)
主要用途
細(xì)菌總ATP酶活性酶連續(xù)反應(yīng)光譜法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用ATP酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定ATP水解產(chǎn)生的ADP過(guò)程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應(yīng), 即采用光譜法測(cè)定其氧化后峰值(NADH濃度)的變化,以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞ATP酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。
技術(shù)背景
腺苷三磷酸酶,又稱為ATP酶(adenosine triphosphatase;ATPase或ATP phosphohydrolase;EC3.6.1.3),屬于磷酸水解酶,可以催化含磷的酸酐分解,即催化三磷酸腺苷分解為二磷酸腺苷和無(wú)機(jī)磷。ATP酶的去磷酸化反應(yīng)釋放出能量,成為細(xì)胞生命代謝的能源。ATP酶為跨膜蛋白(transmembrane),幫助傳輸各種代謝分子進(jìn)出細(xì)胞。根據(jù)ATP酶的結(jié)構(gòu)和功能,分為五類不同的ATP酶,即F、V、A、P和E型。F型,又稱為F1F0型,主要在線粒體、葉綠體或細(xì)菌細(xì)胞膜上,進(jìn)行氧化磷酸化或光合作用;P型,又稱為E1E2 型,存在于細(xì)菌和真核細(xì)胞膜和細(xì)胞器上,其功能在于水解ATP獲得能量,跨膜運(yùn)輸各種化學(xué)分子,包括Ca2+傳輸性、Na+-K+ /H+-K+傳輸性、H+傳輸性和所有細(xì)菌型等。V型,又稱為V1V0型,主要存在于真核細(xì)胞的液泡(vacuole)中。A型,又稱為A1A0型,存在于古生菌(archaea)中。E型,為細(xì)胞表面的酶?;诘孜顰TP, 受到各種組織細(xì)胞中的 ATP酶的水解,進(jìn)而通過(guò)丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,由還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),所產(chǎn)生的峰值變化(340nm),來(lái)定量分析ATP酶的總活性。
用戶自備
15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器
(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作
恒溫?fù)u床:用于細(xì)菌培養(yǎng)
培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)孵育
比色皿:用于光譜分析的容器
分光光度儀:用于光譜分析
注意事項(xiàng)
1.本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照
2.操作時(shí),須戴手套
3.系統(tǒng)操作過(guò)程中,背景測(cè)定只需1次
4.建議樣品忌用磷酸緩沖溶液
5.如果測(cè)定初期,背景對(duì)照吸光讀數(shù)不穩(wěn)定,表明體系均衡溫度不理想,建議樣品加入前孵育由3分鐘延長(zhǎng)至5分鐘
6.加入樣品啟動(dòng)反映后3秒內(nèi)即刻光度測(cè)定
7.反應(yīng)測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定可以持續(xù)20分鐘
8.測(cè)定值由高到低變化,即0分鐘測(cè)定讀數(shù)高于10分鐘或20分鐘測(cè)定讀數(shù),表明有酶活性
9.光譜測(cè)定后,比色皿須清洗*
10.建議待測(cè)樣本蛋白濃度為100微克/50微升;如果樣本酶活性過(guò)低或過(guò)高,則可以增加或降低樣本量;注意計(jì)算公式的調(diào)整(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1)
11.ATP酶活性單位濃度定義:在37℃溫度下,pH 7.5條件下,每分鐘內(nèi)能夠氧化1微摩爾還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)所需的酶量作為一個(gè)活性單位
12.本公司提供系列ATP酶類技術(shù)產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)準(zhǔn)確