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上海哈靈生物科技有限公司
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公司信息
人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒-新品推薦
2013-8-9 閱讀(701)
人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 使用說明書
試劑盒組成：48T/96T
說明書：1份
封板膜：2片（48）/2片（96）
密封袋：1個
目的：【人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 ELISA試劑盒 說明書】本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中介素2（IL-2）的含量。
人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 服務承諾：
供貨期：款到發(fā)貨。
工作時間內免費的技術咨詢和指導 。詳情請
為客戶提供免費代測服務，我們將提供zui準確的實驗數(shù)據(jù)與zui真實的實驗結論。
人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內與批見應分別小于9%和11%
保存條件及有效期：
1.保存條件：2-8℃。
2．有效期：6個月
檢測范圍：
0.2IU/L - 6IU/L
試劑盒組成：
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品：2700ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
實驗原理：
【人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 說明書】試劑盒選用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）。往預先包被人組織蛋白酶K（Cath-K）捕獲抗體的包被微孔中，依次添加標本、規(guī)范品、HRP標記的檢測抗體，通過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的效果下轉化成結尾的黃色。色彩的深淺和樣品中的人組織蛋白酶K（Cath-K）呈正比。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離，收集上清。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，3000轉離心30分鐘取上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心約20分鐘（2000-3000轉/分）。仔細收集上清液，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心約20分鐘（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心約20分鐘（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS（PH7.4）。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?，將標本勻漿充分。離心約20分鐘（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔平別離加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔別離加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl別離加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔平別離加規(guī)范品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔平別離加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔平別離取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔別離加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度別離為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2. 加樣：別離設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作一樣）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui后稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗刷液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗刷：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔參加酶標試劑50μl，空白孔在外。
7. 溫育：同3。
8. 洗刷：同5。
9. 顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 停止：每孔加終止液50μl，停止反響（此刻藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
【人組織蛋白酶K（cath-K）ELISA試劑盒 說明書】注意事項：
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后才可以使用，酶標包被板開封后如未用完，應將板條裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3.各步驟加樣時都應使用加樣器，并經常校對其度，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)量較多，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如果標本中待測物質含量太高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5.封板膜乃限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不能混和使用。
10.如與英文說明書有異，請以英文說明書為準。
