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北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司

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季度* 兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA檢測(cè)試劑盒 北京

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更新時(shí)間:2016-06-19 09:08:53瀏覽次數(shù):702次

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* 兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA檢測(cè)試劑盒 北京價(jià)格

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試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的豚鼠CH50,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
有效期:6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定豚鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中CH50含量。
說明
1
.試劑盒保存:-20(較長時(shí)間不用時(shí));2-8(頻繁使用時(shí))。
2
.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3
.中、英文說明書可能會(huì)有不*之處,請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn)。
4
.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗CH50抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗CH50抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CH50呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1.
酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。
2.
標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。
3.
樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4.
*標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5.
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6.
*標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120ul/瓶(1100
7.
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120ul/瓶(1100
8.
底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9.
濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.
終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的試劑和器材
1.
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2.
高速離心機(jī)
3.
電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.
干凈的試管和Eppendof
5.
系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),用多通道移液器
6.
蒸餾水,容量瓶等
標(biāo)本的采集及保存
1.
血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.
血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.
細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本的稀釋原則:
首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為100 U/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋100 U/ml50 U/ml25 U/ml12.5 U/ml,6.25 U/ml,3.12 U/ml1.56 U/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 U/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制50 U/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml100 U/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
*標(biāo)記抗體的稀釋原則:
臨用前以*標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100ul),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul*標(biāo)記抗體加990ul*標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100ul),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990ul辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1.
加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100ul,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.
棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加*標(biāo)記抗體工作液 100ul(取1ul*標(biāo)記抗體加99ul*標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37,60分鐘。
3.
溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干。
4.
每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同*標(biāo)記抗體工作液) 100ul,37,60分鐘。
5.
溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干。
6.
依序每孔加底物溶液90ul37避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.
依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.
用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
注:
1.
用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
2.
每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3.
為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4.
未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8保存。標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5.
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1.
當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2.
洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3.
一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4.
請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
5.
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6.
在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7.
底物請(qǐng)避光保存。
8.
不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑

兔子組胺(HIS)ELISA試劑盒

公司推出的產(chǎn)品涵蓋了生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物 學(xué)等相關(guān)領(lǐng)

兔子組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒報(bào)價(jià)

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