大鼠可溶性E選擇素（sE-selectin）ELISA 試劑盒
產(chǎn)品英文名稱：Rat soluble E-selectin,sE-selectin ELISA kit
規(guī)格：48T/96T
檢測方法：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）
標(biāo)本：血清，血漿，細(xì)胞上清液，組織等
種屬：Rat鼠
試劑盒說明書：請來電或者郵件索取
價(jià)格：詢價(jià)（ : ：劉）

大鼠可溶性E選擇素（sE-selectin）ELISA 試劑盒

ELISA關(guān)鍵步驟為以下幾點(diǎn):
1、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對于相同的試劑，經(jīng)如二抗，酶，顯色液，終止液等。
2、自己的樣品，因?yàn)槊恳豢椎臉悠凡灰粯?，用排槍加有些麻煩，如果一次的樣品比較少，而自己加樣又比較快，可以一個孔一個孔的加，但如果想一次把96或者48T的做完，可以先擺好一些PCR管或者準(zhǔn)備一個96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。將自己的樣品先加到PCR管或者培養(yǎng)板中（此板間距與酶板板相同）。記得加一定的余量，如一次加樣是50ul，可以先加70ul。加完后再用排槍加樣，這樣可以縮短加樣時間，減小每個孔間的時間誤差。
3、如果有多余的孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔可以做復(fù)孔，在自己的樣品前加一次標(biāo)準(zhǔn)品，加完樣品后再加一次標(biāo)準(zhǔn)品。如果孔不夠，那么可以將標(biāo)準(zhǔn)品放在樣品中間加。

操作步驟 ：
1. 取出 試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。
2. 分組： 取出 96 孔板 根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù)
冷藏處理，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個濃度）、空白 孔、待測樣品組。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入100ul的蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標(biāo)溶液 （空白對照孔除外）。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。
8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應(yīng)10 -15分鐘， 加入 50 ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm波長讀取各孔的O 值。注： 讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

數(shù)據(jù)計(jì)算
1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即堅(jiān)強(qiáng)空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）
1.2計(jì)算器或手工作圖處理：Logit-log 計(jì)算：以6個標(biāo)準(zhǔn)品OD 值的 Logit為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度的 log值為橫坐標(biāo)X，繪制曲線圖。logit值計(jì)算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工
作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)，在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的 B/B0B為縱坐標(biāo)在 logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時是一條直）。
2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是zui后濃度值。
3.敏感度：1.0µmol/L