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解析elisa試劑盒中常見問題
點擊次數：268 發(fā)布時間：2013-6-7
elisa試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。在操作過程中各個環(huán)節(jié)常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給實驗師帶來一些啟發(fā)，提高試驗質量。
1 選擇試劑 選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒*混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 2） 加樣后及時放入孵箱。 3） 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5） 標本較多時，請分批操作。
3 孵育 可能原因： 1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2） 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說明步驟嚴格控制操作時間。
4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2） 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。 3） 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2） 合理安排，或多用幾臺洗板機。
5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2） 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時保持顯色劑不外流； 3） A、B液應避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。
7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。