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ELISA實驗?zāi)康?/h2>

閱讀:12027發(fā)布時間:2014-2-20

 

一、實驗?zāi)康?/span>

1.深入了解ELISA 法測定抗體效價的原理。

2.掌握ELISA 法測定單克隆抗體效價的方法。

二、實驗原理

ELISA 是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上,形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原,稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后,作用于底物使之呈色,根據(jù)顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一種,其特點是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗滌,這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系,也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA 法中.酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次,而抗原的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)。

目前常用的幾種ELISA 方法有:測定抗體的間接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi),加待測抗體,保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì),加酶標(biāo)抗抗體,保溫后洗滌,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿終止酶促反應(yīng),用目測或光電比色測定抗體含量。


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