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新生牛血清的病毒檢查方法

閱讀:356發(fā)布時間:2017-8-21

新生牛血清從出生14小時內(nèi)未進食的新生牛采血分離血清,經(jīng)除菌過濾后制成。牛血清生產(chǎn)過程中不得任意添加其他物質(zhì)成分。

  新生牛血清的病毒檢查  

  1. 細胞培養(yǎng)法  

 ?。?)非血吸附病毒檢查  

  將新生牛血清供試品分別接種到人源(如*)、猴源(如Vero細胞)以及牛腎傳代細胞三種細胞,采用的牛腎傳代細胞系應(yīng)證明無牛病毒的污染。每種細胞至少接種6瓶,每瓶細胞懸液接種量不少于培養(yǎng)液總量的25%。于36±1℃培養(yǎng)21天。接種的每種細胞都應(yīng)同時設(shè)立牛血清陰性對照和病毒陽性對照,陰性對照用牛血清應(yīng)證明無牛病毒污染。

  培養(yǎng)過程中可根據(jù)細胞生長情況更換細胞培養(yǎng)液,每次更換培養(yǎng)液前應(yīng)觀察(肉眼/顯微鏡)有無細胞病變出現(xiàn)。培養(yǎng)到期后,陰性對照應(yīng)無任何細胞病變出現(xiàn),陽性對照應(yīng)出現(xiàn)典型的細胞病變,試驗成立。供試品檢查應(yīng)不出現(xiàn)任何細胞病變?yōu)殛幮裕弦蟆?nbsp;

 ?。?)血吸附病毒檢查  

  將上述接種供試品的每種細胞取2瓶進行血吸附病毒檢查。用0.2%~0.5%雞和豚鼠紅細胞混合懸液覆蓋于細胞表面,置2~8℃分鐘,然后置20~25℃30分鐘,分別進行鏡檢,觀察紅細胞吸附情況, 供試品檢查結(jié)果均應(yīng)為陰性。試驗同時應(yīng)設(shè)立血吸附陽性對照。 

  2. 免疫熒光抗體檢查法  

  采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法,至少應(yīng)對牛腹瀉病毒,牛腺病毒、牛細小病毒、呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進行檢查,結(jié)果均應(yīng)為陰性。


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