根據(jù)我司多年的經(jīng)驗(yàn)而談：elisa試劑盒在結(jié)果中判斷需要多方面原因。對(duì)此本章小編就ELISA試劑盒結(jié)果判斷中對(duì)定性測(cè)定，陽(yáng)性判斷做出具體分析。
ELISA檢測(cè)中試劑的結(jié)果判斷之定性測(cè)定
定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出 "有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作
一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。在間接法和夾心法 ELSIA 中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA 中則相反，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同，分述于下。
(1) 間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無(wú)色或近于無(wú)色者判為陰性，顯色清晰者為陽(yáng)性。但在 ELSIA 中，正常人血清反應(yīng)后?？沙霈F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異，因此實(shí)驗(yàn)中必須加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷
結(jié)果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽(yáng)性的指標(biāo)。
目視法簡(jiǎn)捷明了，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本( sample，S)、陽(yáng)性對(duì)照(P)、和陰性對(duì)照(N)的吸光值，然后進(jìn)行計(jì)算。計(jì)算方法有多種，大致可分為陽(yáng)性判定值法和標(biāo)本與陰性對(duì)照比值法兩類。
a． 陽(yáng)性判定值
陽(yáng)性判定值(cut-off value)一般為陰性對(duì)照A 值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。
用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定，試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化，陽(yáng)性和陰性的對(duì)照品應(yīng)符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽(yáng)性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過(guò)對(duì)大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)而得到的?，F(xiàn)舉某種檢測(cè) HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg 的復(fù)鈣人血漿，陽(yáng)性對(duì)照品HBsAg 的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗(yàn)設(shè)2 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照和3 個(gè)陰性對(duì)照。測(cè)得A 值后，先計(jì)算陰性對(duì)照A 值的平均數(shù)(NC X )和陽(yáng)性對(duì)照A 值的平均數(shù)(PCX)，兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400)，試驗(yàn)才有效。3 個(gè)陰性對(duì)照 A 值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A 值超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。
ELISA檢測(cè)中試劑的結(jié)果判斷陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算：
陽(yáng)性判定值=NCX+0.05標(biāo)本 A 值＞陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是，式中0.05 為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。根據(jù)以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會(huì)產(chǎn)生"試驗(yàn)無(wú)效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值
在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本( S)和陰性對(duì)照(N)的A 值后，計(jì)算S/N 值。也有寫作P/N 的，這里的P 不代表陽(yáng)性(positive)，而是病人(pati ent)的縮寫，不應(yīng)誤解。為避免混淆，更宜用S/N 表示。在早期的間接法ELISA 中，有些作者定出S/N 為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)多為各種測(cè)定所沿用。實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的 S/N 的閾值。更應(yīng)注意的是，N 所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類試劑盒規(guī)，如 N<0.05(或其他數(shù)值)，則按0.05 計(jì)算，否則將出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
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