大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步驟本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)的含量。
大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步驟 實驗原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)水
平。用純化的大鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)，再與HRP 標記的生
長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*
洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui
終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)呈正相關(guān)。用酶標
儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠生長激素釋放肽
ghrelin(GHRP-Ghrelin)濃度。
大鼠GHRP-Ghrelin elisa操作步驟 試劑盒組成：
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片（48） 2 片（96）
密封袋 1 個 1 個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：1800ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
2
分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞
濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分
鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br>用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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