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人平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)說明書

時(shí)間:2014-7-21閱讀:2540
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人平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)說明書

實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)水平。用純化的人平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC),再與HRP 標(biāo)記的平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人平滑肌肌球蛋白重鏈(smMHC)含量。

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標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉,再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,
濃度分別為90 pg/mL,60 pg/mL ,30 pg/mL,15 pg/mL,7.5 pg/mL)。

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