小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒G-CSF價格操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標
準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二
孔中各取 100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,
混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混
勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,
濃度分別為 150 pg/mL,100 pg/mL ,50 pg/mL,25pg/mL,12.5 pg/mL)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣
品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混
勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30(48T的 20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的 20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒G-CSF價格注意事項:
新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮?,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復凍融。
安全性:
1. 避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。
4 Elisa試劑盒請遠離兒童
自備物品:
1 、 37 ℃ 恒溫箱2 、 標準規(guī)格酶標儀3 、 精密移液器及一次性吸頭4 、 蒸餾水
5 、 一次性試管6 、 吸水紙
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