ELISA試劑盒方法的基本操作原理介紹

常用的小鼠Ⅻ型膠原(COL12)試劑盒法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測(cè)大分子抗原，后者用于測(cè)定特異抗體。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用zui廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體( 聚苯乙烯微量反應(yīng)板 )表面，使酶標(biāo)記的抗原-抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

1、競(jìng)爭(zhēng)ELISA：此法主要用于測(cè)定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測(cè)定。

其基本程序?yàn)椋?/span>

① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原小鼠Ⅻ型膠原(COL12)試劑盒（對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

④ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

   被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測(cè)；其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記，而且因?yàn)榭乖慕Y(jié)構(gòu)不同，還需應(yīng)用不同的結(jié)合方法。此外試驗(yàn)中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。

2、阻斷ELISA

   本法主要用于檢測(cè)型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬?。?/span>PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測(cè)方法。

下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測(cè)法為例介紹其操作程序：

① 小鼠Ⅻ型膠原(COL12)試劑盒100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 用200μl阻斷緩沖液進(jìn)行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑦ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

本試驗(yàn)同時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清對(duì)照、兔抗AP2型陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照。

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