ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)水平。用純化的人大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)，再與HRP標(biāo)記的大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)水平。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180U/mL, 120U/mL , 60U/mL, 30U/mL,15 U/mL）。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒其它同類(lèi)試劑盒*如下：

HZC931Hu    人神經(jīng)肽S受體(NPSR)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Neuropeptide S Receptor (NPSR) 
HZS415Hu    人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子145(VEGF145)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor 145 (VEGF145) 
HZS098Hu    人肌漿球蛋白(Myo)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Myosin(Myo) 
HZC046Hu    人S100鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)ELISA試劑盒    ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A10 (S100A10) 
HZD216Hu    人絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Chorionic Gonadotropin (CG) 
HZF358Hu    人熱休克蛋白β6(HSPβ6)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 6 (HSPb6) 
HZF822Hu    人磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Phosphatase And Tensin Homolog (PTEN) 
HZC667Hu    人神經(jīng)正五聚蛋白受體(NPTXR)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Neuronal Pentraxin Receptor (NPTXR) 
HZE773Hu    人免疫缺陷伴血小板減少綜合征蛋白家族成員2(WASF2)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Wiskott Aldrich Syndrome Protein Family, Member 2 (WASF2) 
CEC506Hu    人胃泌素釋放肽(GRP)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Gastrin Releasing Peptide (GRP) 
HZD079Hu    人碳酸酐酶Ⅻ(CA12)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Carbonic Anhydrase XII (CA12) 
HZC059Hu    人周期素依賴性激酶6(CDK6)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Cyclin Dependent Kinase 6 (CDK6) 
HZC814Hu    人腫瘤易感基因101(TSG101)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Tumor Susceptibility Gene 101 (TSG101) 
HZN064Hu    人N-乙酰轉(zhuǎn)移酶8樣蛋白(NAT8L)ELISA試劑盒    ELISA Kit for N-Acetyltransferase 8 Like Protein (NAT8L) 
HZE275Hu    人脾臟酪氨酸激酶(SYK)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Spleen Tyrosine Kinase (SYK)大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)試劑盒 
HZC946Hu    人黑色素聚集激素受體1(MCHR1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Melanin Concentrating Hormone Receptor 1 (MCHR1) 
HZL437Hu    人δ樣蛋白1同源物(δLK1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Delta Like 1 Homolog (dLK1) 
HZC939Hu    人蛋白酶激活受體1(PAR1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Protease Activated Receptor 1 (PAR1) 
HZH326Hu    人Mg2+/Mn2+依賴性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Protein Phosphatase, Mg2+/Mn2+ Dependent 1A (PPM1A) 
HZA173Hu    人甲基多巴1β(MEP1β)ELISA試劑盒    ELISA Kit for Meprin A Beta (MEP1b) 
HZQ217Hu    人鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶β4肽(ATP1β4)ELISA試劑盒    ELISA Kit for ATPase, Na+/K+ Transporting Beta 4 Polypeptide (ATP1b4) 
HZG920Hu    人UDP葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶1家族多肽A1(UGT1A1)ELISA試劑盒    ELISA Kit for UDP Glucuronosyltransferase 1 Family, Polypeptide A1 (UGT1A1) 
HZC271Hu    人5-羥色胺受體1A(HTR1A)ELISA試劑盒    ELISA Kit for 5-Hydroxytryptamine Receptor 1A (HTR1A)