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綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子宮頸癌細(xì)胞,U14-GFP細(xì)胞現(xiàn)貸*

時(shí)間:2014/8/21閱讀:924
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綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子宮頸癌細(xì)胞,U14-GFP細(xì)胞培養(yǎng)的污染類(lèi)型及處理
污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。一開(kāi)始就要十分重視,應(yīng)積極采取措施,防止污染,否則會(huì)前功盡棄,不僅浪費(fèi)時(shí)間,而且浪費(fèi)人力、物力,甚至造成無(wú)法彌補(bǔ)的損失。

細(xì)菌污染

可能原因

建議解決方法

細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染,即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素(一般為預(yù)防劑量),也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴?。zui常見(jiàn)的有革蘭氏陽(yáng)性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見(jiàn)。

培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后,會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無(wú)多少改變,只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以,每天應(yīng)仔細(xì)觀察。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,zui后變圓脫落死亡,造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。

 

真菌污染

可能原因

建議解決方法

 真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中zui常見(jiàn)的一種,尤其在霉雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。zui常見(jiàn)的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。

 

培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后,會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子宮頸癌細(xì)胞,U14-GFP細(xì)胞也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無(wú)多少改變,只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以,每天應(yīng)仔細(xì)觀察。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,zui后變圓脫落死亡,造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。

五、非同種細(xì)胞污染
由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒(méi)有嚴(yán)格分開(kāi),操作不當(dāng),往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。如“靈長(zhǎng)類(lèi)”細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)猴和鼠類(lèi)細(xì)胞的混合物,ERK/KD細(xì)胞是從兔腎中分離出來(lái)的,而現(xiàn)在句卻認(rèn)為是HeLa細(xì)胞。目前,世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。
非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。

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