大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟 

一、預(yù)試驗(yàn)（一）抗體包被的酶標(biāo)板的制備

1.  以碳酸鹽緩沖液將抗體稀釋成適當(dāng)濃度（參考：5ug/ml），加入酶標(biāo)板（50ul/孔），以膠帶封口，于4℃過(guò)液。

2.  棄抗體液，以雙蒸水沖洗3次，自然干燥后以膠帶封口。此為由已知抗體包被的酶標(biāo)板，備用。

（二）底物濃度的摸索在底物緩沖液中加入不同量的底物（參考：5mg/10ml），加入酶標(biāo)板中（50ul/孔），以膠帶封口，37℃避光保存2h，在沒(méi)有明顯變色的條件下選擇盡可能大的底物濃度。

（三）酶標(biāo)抗原濃度的摸索選擇明確為陰性的標(biāo)本，加至已包被抗體的酶標(biāo)板中（50ul/ 孔）；用稀釋液稀釋酶標(biāo)抗原至適當(dāng)倍數(shù)（參考：40~4000倍），同時(shí)加入酶標(biāo)板中（50ul/ 孔），混合后封口后于37℃作用30min。大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒以洗液連續(xù)沖洗5次，然后于吸水紙上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min，在保持有明顯變色的條件下選擇盡可能小的酶標(biāo)抗原濃度。

二、正式試驗(yàn)

1.  以稀釋液將待檢標(biāo)本做適當(dāng)稀釋?zhuān)A(yù)試中確定）加入包被有已知抗原的酶標(biāo)板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。

2.  棄反應(yīng)液，以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干。

3.  加入酶標(biāo)抗體（濃度在預(yù)試中確定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。

4.  重復(fù)第2步。

5.  加底物（濃度在預(yù)試中確定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min，其間不時(shí)觀(guān)察，顯色滿(mǎn)意后加終止液50ul/孔。

6.  于酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，OPD用492nm測(cè)定，TMB用450nm測(cè)定。窗體頂端

大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒結(jié)果演示

大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒結(jié)果判斷定性測(cè)定 

  定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀(guān)察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。

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