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齊一生物科技(上海)有限公司資料大小
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131次谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
Gu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,不僅是組成蛋白質(zhì)的20 種氨基酸之一,
而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外,Glu還是
味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。
測定原理:
利用提取液提取,然后用顯色劑進行顯色,顯色后在 570nm 下進行測定。
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;臨用前加入 10mL 蒸餾水,充分混勻溶解,用不完的試劑
仍 4℃保存。
谷氨酸提?。?
1、細菌或培養(yǎng)細胞樣品:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞
數(shù)量(104
個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 1000 萬細菌或細胞加入
2mL 試劑一) ,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重
復 30 次);8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g) :試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.2g組
織,加入 2mL試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)或細胞培養(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細胞培養(yǎng)液體積(mL) :試劑一體積
(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.2mL 血清(漿)或者細胞培養(yǎng)液加入 2mL 試劑一) ,進
行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測。
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱 30min以上,調(diào)節(jié)波長至 570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 在有蓋 EP管中加入下列試劑:
試劑名稱(μL) 測定管 對照管
樣本 1000
試劑一 1000
試劑二 200 200
混勻,90℃水浴20min(蓋緊,以防止水分散失) ,流水冷卻,于570nm波長處比色,△A=A
測定管-A 對照管。對照管只要做一管。
注意事項:
為提高檢測靈敏度,測定管的吸光值應(yīng)小于 1,若大于1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適
當倍數(shù)后測定,計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
谷氨酸含量計算:
1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423; x為谷氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。
2、按照血清(漿)或者細胞培養(yǎng)液體積計算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2)=304.9×(△A+2.423)
3、按照蛋白濃度計算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計算
谷氨酸含量(µg/g鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
谷氨酸含量(μg/104
cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,2 mL;V3:加入血清(漿)
或細胞培養(yǎng)液體積,0.2 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;1000:
細菌或細胞總數(shù),1000萬。
注意:該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測定,檢測下限為70µg/mL。
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒齊一生物現(xiàn)貨供應(yīng)
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