三、試劑盒以外自備儀器和試劑

可調(diào)移液器、垂直板電泳儀、雙蒸水

SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒四、操作步驟

1、根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠)：不同濃度的SDS-PAGE分離膠的分離范圍：

2、按照下面的配方進(jìn)行配制（總體積為15ml），如有體積變動(dòng)可按比例進(jìn)行放大或縮小。過硫酸銨配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸餾水溶解），分裝成小管-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。

注：如果配制非變性膠，參考上述配方，不加10%SDS即可配制成非變性PAGE膠。

For Research Use Only

僅供研究用

3、按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠)：

成分	配制不同體積 SDS-PAGE 濃縮膠所需各成分的體積(毫升)

5%膠	2	3	4	6	8	10

蒸餾水	1.4	2.1	2.7	4.1	5.5	6.8

30% Acr-Bis（29：1）	0.33	0.5	0.67	1.0	1.3	1.7

1M Tris-HCl, pH6.8	0.25	0.38	0.5	0.75	1.0	1.25

10% SDS	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1

10%的過硫酸銨	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1

TEMED	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

五、注意事項(xiàng)：

1、所過硫酸銨配制成10%溶液后，應(yīng)當(dāng)-20℃保存。同時(shí)應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，以防失效。

2、 TEMED宜避光保存。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切，可通過適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED的用量，控制在不同的室

內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。

3、請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

4、

六、保存條件：

1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (過硫酸銨) 粉末和1M Tris-HCl, pH6.8室溫或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。

過硫酸銨配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸餾水溶解，1g中9ml蒸餾水溶解），分裝成小管-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。

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SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒說明書