惡性黑色素瘤,A375細胞

【研究范圍】僅供科研使用
【細胞特征】每兩到三天進行換液。細胞應(yīng)當在融合前傳代
【細胞培養(yǎng)表述】
一、態(tài)觀察。細胞膜是每天必須觀察的，看是否清晰，細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的，早期的表現(xiàn)就是細胞膜某一點出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。
二、細胞往往會有“抱團"現(xiàn)象，抱團生長或死亡，個人認為應(yīng)該勤換液或傳代，盡量避免細胞抱團。
三、長迅速，強烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng)，用小瓶養(yǎng)的話，換液不及時，很容易死亡。細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代，并且一般為一傳三，或一傳四。
四、培養(yǎng)液：1640培養(yǎng)液，1L一般加*2g，并加雙抗，胎牛血清濃度*為12%，zui低不低于10%，細胞對胎牛血清高度依賴。培養(yǎng)液PH應(yīng)調(diào)為7.20-7.40之間。
五、防污染。細胞生長迅速，較少發(fā)生污染，但常規(guī)措施應(yīng)該做好。比如無菌操作，酒精消毒等，培養(yǎng)瓶口建議過火，包括瓶蓋，應(yīng)過火4秒左右。
六、凍存。-20一小時，-80一夜，液氮*保存。強烈建議液氮*保存，盡量不要在-80*保存，死亡率很高。
七、復(fù)蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃，并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液溫度與室溫*。1分鐘內(nèi)融化細胞（禁止搖晃凍存管），移取至試管內(nèi)，動作要輕，從試管管底開始慢慢上提移液管，使細胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻，離心，洗2次。

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