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外周血細(xì)胞瑞氏(Wright)染色及計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

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正血液常規(guī)檢查是臨床使用zui多的化驗(yàn)項(xiàng)目,其中白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)又是血常規(guī)中必做化驗(yàn)之一。目前,我國各地醫(yī)院化驗(yàn)室在做白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)時(shí),其血涂片多采用瑞氏(Wright’s)染色法。瑞氏染料中有美藍(lán)和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力,使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào)。

實(shí)驗(yàn)方法

  • 涂片法
實(shí)驗(yàn)方法原理瑞氏染料中有美藍(lán)和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力,使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào)。血細(xì)胞核由去氧核糖核酸和強(qiáng)堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強(qiáng)堿性的物質(zhì)與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力,所以染成紅色;核蛋白中還有少量的弱酸性蛋白,它們又與染液中的堿性染料美藍(lán)起作用而染成藍(lán)色,但含量太少,藍(lán)色反應(yīng)極弱 ,故核染色呈現(xiàn)紫紅色。較幼稚的細(xì)胞之胞漿和細(xì)胞核之核仁中含有酸性物質(zhì),它們與染料中的堿性染料美藍(lán)有親和力,故染成藍(lán)色。
實(shí)驗(yàn)材料

血液

試劑、試劑盒

瑞氏染料純甲醇磷酸二氫鉀*

儀器、耗材

顯微鏡玻片蓋玻片滴管

抗體

Hamster IgG3, λ抗體
Hamster IgG3, λ抗體
Hamster IgG3, λ抗體

實(shí)驗(yàn)步驟

1.  制作血涂片

(1)滴一小滴血(約5 ul)于干凈玻片上,推片與玻片應(yīng)呈約30°角,用力均勻而較快,且不可復(fù)推。

(2)如血滴較小,推得較慢,角度小于30°,所制涂片較薄。

(3)如血滴較大,推得較快,角度比30°大時(shí),則所制涂片較厚。


2.  將標(biāo)本放平(置于一個(gè)固定架上),用滴管將染液滴于涂片上,可用滴管將染液驅(qū)散,使其布滿整個(gè)涂片。

3.  染液布滿整個(gè)涂片后,稍等片刻或立即加入緩沖液,并使緩沖液與染液混均勻。


4. 染液與緩沖液的比例

(1)染液量要充足,否則染液很快蒸發(fā),將染料沉淀于細(xì)胞上。

(2)染液與緩沖液的比例為1:2~4左右比較合適。

(3)稀釋度越大,染色時(shí)間越長,細(xì)胞著色較好,反之則越差。


5. 染色時(shí)間:視具體情況而定,一般約需10~30分鐘。


6. 沖洗:用自來水沖洗涂片上之染料。


7. 顯微鏡檢查:待自然干燥后用光學(xué)顯微鏡檢查。

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