小鼠層粘蛋白(Laminin)ELISA試劑盒（BD）

操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法：

為什么ELISA試劑盒出現(xiàn)白板，陽性對照不顯色？

1、未加A、B顯色液——不要漏加A液和B液

2、洗滌液配制有誤——請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

3、未加酶結合物而認為已加入——注意不要漏加

4、終止液誤作洗滌液稀釋或當?shù)孜镆菏褂?mdash;—每次加液前均應看清標簽

小鼠層粘蛋白(Laminin)ELISA試劑盒（BD）為什么ELISA試劑盒顯色淡，靈敏度偏低？

1、試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高——盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫

2、試劑盒未充分平衡——試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。

3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃——注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應注意

4、保溫時間不足——校正定時鐘準確定時

5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加——按說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數(shù)

6、移液器吸液量不足，吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔——校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內壁要清潔，一次性使用

7、蒸餾水水質有問題——使用新鮮合格的蒸餾水

8、底物作用時間不足——準確定時

小鼠層粘蛋白(Laminin)ELISA試劑盒（BD）為什么ELISA試劑盒重復性不佳?

1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時間有長有短——重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近

2、保溫時間不*，洗滌條件不*，操作人員不*——重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性

3、加樣量不*——樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

小鼠層粘蛋白(Laminin)ELISA試劑盒（BD）為什么ELISA試劑盒背景深，全部呈有色,臨界對照OD值超出規(guī)定范圍？

1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留——濃縮洗液準確配制；10倍濃縮洗滌液如有結晶則應讓結晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染

2、樣品污染——樣品應新鮮采集，或低溫保存，防止污染

3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應時間過長——調整培養(yǎng)箱溫度，準確定時

4、吸嘴重復使用，未洗凈或消毒不*——吸嘴盡可能一次性使用

5、蒸餾水被污染——使用新鮮蒸餾水

6、酶等試劑混用——不同批號試劑勿混用

7、一次實驗的標本量過多，加樣時間太長，導致實際反應時間延長——合理安排實驗，避免幾塊酶標板同時加樣.

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