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江蘇綠葉生物科技有限公司

CRISPR編輯iPS細(xì)胞的脫靶情況

時(shí)間:2014-11-28閱讀:406
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CRISPR基因編輯和iPS重編程是近年來(lái)的兩大熱點(diǎn)技術(shù)。CRISPR/?Cas9已經(jīng)在多個(gè)領(lǐng)域中展現(xiàn)了自己強(qiáng)大的特異性基因靶標(biāo)能力。而iPS重編程在構(gòu)建疾病模型和新藥開(kāi)發(fā)中有著很高的應(yīng)用價(jià)值。將CRISPR應(yīng)用到iPS細(xì)胞中去,似乎是一件大勢(shì)所趨的事情。

在人iPS細(xì)胞中進(jìn)行了CRISPR基因編輯。將全基因組測(cè)序和靶向深度測(cè)序結(jié)合起來(lái),評(píng)估了?Cas9編輯iPS細(xì)胞時(shí)的脫靶效應(yīng),還鑒定了一個(gè)影響Cas9特異性的單核苷酸變異(SNV)。

Cas9核酸酶的潛在脫靶效應(yīng),一直是CRISPR技術(shù)用于臨床的一個(gè)主要障礙。為此,研究人員通過(guò)CRISPR/?Cas9系統(tǒng)在人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)中敲除了Tafazzin基因,效率達(dá)到54%。

上海隆壘生物科技有限公司對(duì)?Cas9編輯過(guò)的人類iPSC進(jìn)行了全基因組測(cè)序,結(jié)果并未發(fā)現(xiàn)顯著的基因組改變或突變率提高。研究人員還深度測(cè)序了計(jì)算機(jī)模擬的Cas9脫靶位點(diǎn),進(jìn)一步驗(yàn)證了?Cas9的高特異性。

上海隆壘生物科技有限公司研究人員發(fā)現(xiàn),常見(jiàn)的生殖細(xì)胞系單核苷酸變異(SNV),會(huì)生成脫靶位點(diǎn)影響基因編輯的特異性。他們對(duì)人類基因組的這種SNV進(jìn)行了評(píng)估,發(fā)現(xiàn)它生成脫靶位點(diǎn)的可能性大約為1.5–8.5%。據(jù)介紹,這種SNV的突變率并不高,可能也不會(huì)產(chǎn)生功能性影響。

上海隆壘生物科技有限公司研究為人們展示了用CRISPR/?Cas9在iPS細(xì)胞中進(jìn)行高特異性基因編輯的可行性。文章指出,在設(shè)計(jì)CRISPR編輯之前*行全基因組測(cè)序是很有價(jià)值的。

發(fā)表了*直接基因組測(cè)序方法,該文章中的一些策略現(xiàn)在仍應(yīng)用在二代測(cè)序技術(shù)中。此外,如今的多重化分子技術(shù)和條碼式標(biāo)簽也是他發(fā)明的。Church還是納米孔測(cè)序技術(shù)的之一。

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