細(xì)胞名稱

PA317 暫不供應(yīng)小鼠成纖維細(xì)胞

描述

PA317細(xì)胞株源自TK- NIH/3T3細(xì)胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。 通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細(xì)胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細(xì)胞的雙嗜性載體顆粒。 這株細(xì)胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悺?可能因為用于構(gòu)建這株細(xì)胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細(xì)胞百分比隨傳代而減少。 在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細(xì)胞。 選擇后，細(xì)胞應(yīng)在HT培養(yǎng)基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤。 Cells shipped from the ATCC have been selected in medium containing 0.03 mM hypoxanthine, 0.001 mM amethopterin (methotrexate), and 0.02 mM thymidine prior to freezing, and should be grown in HT medium for 4 days after receipt. 此后細(xì)胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個月。

動物種別

小鼠

性別

***

組織來源

胚胎

形態(tài)

成纖維細(xì)胞

培養(yǎng)基和添加劑

DMEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

供應(yīng)限制

REFERENCE

Miller AD , Buttimore C . Redesign of retrovirus packaging cell lines to avoid recombination leading to helper virus production. Mol. Cell. Biol. 6: 2895-2902, 1986. PubMed: 3785217 Miller AD . DNA contructs for retrovirus packaging cell lines. US Patent 4,861,719 dated Aug 29 1989 Rosenberg SA , et al. Gene transfer into humans--immunotherapy of patients with advanced melanoma, using tumor-infiltrating lymphocytes modified by retroviral gene transduction. N. Engl. J. Med. 323: 570-578, 1990. PubMed: 2381442 Chin J Cell Mol Immunol 18(2):146-148, 2002 Shanghai Immunol Journal 23(1):16-19,2003