鹽析法原理

    蛋白質的溶解度在一定范圍內 隨鹽的濃度變化而變化。在低鹽濃度下溶解度隨著鹽濃度升高而增加，當鹽濃度達到一定水平時，其溶解度又以不同程度下降并先后析出。其原理是由于蛋白質分子的極性基團有著靜電引力，當水中加入少量鹽類時，鹽類離子與水分子對蛋白質分子上極性基團的影響，使蛋白質在水中溶解度增大。但鹽濃度增加到一定程度時，水的活度降低，蛋白質表面的電荷被中和，水化膜破壞，致使蛋白質分子相互聚集而沉淀。鹽析法就是根據(jù)不同蛋白質在一定濃度的鹽溶液中溶解度不同而達到彼此分離的方法。

    鹽的選擇

    蛋白質鹽析常用中性鹽，主要有硫酸銨、*、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其中應用zui廣的是硫酸銨，其優(yōu)點是溫度系數(shù)小，溶解度大（25℃時飽和溶解度為4.1mol/L，即767g/L）。在不同的飽和硫酸銨溶液范圍內，不同蛋白質依次析出；而且硫酸銨價廉易得，分段效果好，不容易引起蛋白質變性。硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間，市售的硫酸銨還常含有少量游離硫酸，pH值往往在4.5以下，須用氨水調節(jié)其pH值至7.0左右。

    鹽析時的注意問題

    1、鹽的飽和度：鹽的飽和度是影響蛋白質鹽析的主要因素，不同蛋白質的鹽析要求鹽的飽和度不同。分離幾個混合組分的蛋白質時，鹽的飽和度常由低到高逐漸增加，每出現(xiàn)一種蛋白質沉淀進行離心分離后，再繼續(xù)增加鹽的飽和度，使第二種蛋白質沉淀。如用硫酸鹽鹽析分離血漿蛋白，當飽和度達到20%時，纖維蛋白原首先析出；飽和度增至28%~33%時，優(yōu)球蛋白析出；飽和度達到33%~50%時，球蛋白析出；飽和度大于50%以上時，清蛋白析出，免疫球蛋白常在飽和度在33%開始析出。

    2、pH值：在等電點時，蛋白質溶解度zui小，容易沉淀析出。因此，鹽析時除個別特殊情況外，pH值常選擇在被分離的蛋白質等電點附近。

    3、蛋白質濃度：在相同鹽析條件下，蛋白質濃度越高越易沉淀，高濃度雖對沉淀有利，但濃度過高，也容易引起其他蛋白的共沉淀，因此，必須選擇適當濃度，盡可能避免共沉淀作用的干擾。

    4、溫度：由于高濃度的鹽溶液對蛋白質有一定保護作用，鹽析操作一般可在室溫下進行，但在使用某些中性鹽進行鹽析時，溫度對鹽溶解度的影響比較明顯。

    5、脫鹽：蛋白質用鹽析沉淀分離后，常需要脫鹽才能獲得純品。zui常用的脫鹽方法是透析。通過透析袋內外的離子交換，zui后使透析袋內溶液的鹽濃度與外界相一致。