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技術(shù)文章

動(dòng)物組織樣本的前處理

點(diǎn)擊次數(shù):251 發(fā)布時(shí)間:2015-8-26

一、勻漿介質(zhì)的制備:

一般采用pH 7.40.01mol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA-2Na0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質(zhì)。

二、組織勻漿的制備

1、取組織塊(0.1g~0.2g)zui少可到25mg在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放入5ml的勻漿管中。

2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(pH7.4, 0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化鈉溶液)或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。

3、勻漿的方式有多種:手工勻漿,機(jī)器勻漿,超聲粉碎。

① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,制成10%的勻漿液。

② 機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時(shí)間。

③ 超聲粉碎:用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。

        鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時(shí)間。

4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測定.

、樣本保存:

        動(dòng)物組織樣本暫時(shí)不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。

        制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測定,如放置時(shí)間過長相關(guān)酶活會有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測定可存5~7天等)



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酪醇對照品/標(biāo)準(zhǔn)品
哈巴俄苷對照品/標(biāo)準(zhǔn)品
鉤吻素子標(biāo)準(zhǔn)品,cas:1358-76-5對照品
β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
*雜質(zhì)A對照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*異煙肼標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
殺螟丹標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:15263-53-3
3-溴聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:2113-57-7
CAS:2196-14-7,7,4'-二羥基黃酮標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
硝酸根離子(NO3-)標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
鬧羊花素II標(biāo)準(zhǔn)品,cas:26116-89-2對照品
柯諾辛標(biāo)準(zhǔn)品,cas:6877-32-3對照品
CAS:136849-88-2,灰氈毛忍冬皂苷乙標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
CAS:508-01-0,大豆皂醇A標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
Methylxanthoxylin標(biāo)準(zhǔn)品,cas:23121-32-6對照品
7-表-10-去乙?;? (*雜質(zhì)Ⅱ)對照品/標(biāo)準(zhǔn)品
倒千里光堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:480-54-6對照品
CAS:86-30-6,N-亞硝基二苯胺標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
CAS:1861-32-1,氯酞酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
CAS:5103-73-1,Cis-九氯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
異黃腐醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:70872-29-6對照品
匙羹藤酸 I標(biāo)準(zhǔn)品,cas:122168-40-5對照品
CAS:466-24-0,苯甲酰烏頭原堿標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
10—羥基癸烯酸對照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*雜質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
洛貝林硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品,cas:134-64-5對照品
CAS:60238-56-4,蟲螨磷標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
17-氫-9-去氫*內(nèi)酯-19-硫酸酯鈉標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
CAS:53209-27-1,2''-O-沒食子酰基金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
王漿酸標(biāo)準(zhǔn)品,cas:14113-05-4對照品
CAS:81385-77-5,咪唑乙*標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
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CAS:709-98-8,敵稗標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價(jià)格
CAS:57817-89-7,甜菊苷標(biāo)準(zhǔn)品/對照品
香葉醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:106-24-1對照品
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