人叉頭框蛋白03(FoxO3)Elisa試劑盒

二．實驗材料與試劑配制：

1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。

三．樣品收集、處理及保存

1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2）細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3）血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4）血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5）體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.）組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。

樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人叉頭框蛋白03(FoxO3)Elisa試劑盒

分析前質(zhì)控
●人員培訓(xùn)   實驗是人操作的，因此檢驗人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識：
◎檢驗項目的基本原理 （ELISA原理）；
◎臨床意義；
◎熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；
◎熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；
◎ 熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。
◎某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專門培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。
分析前質(zhì)控
◎ELISA原理：1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA技術(shù)。
特點(diǎn) ：在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"
                酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號放大；
                有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過程；
                靈敏度特異性相對較高。
局限性：只能檢測到ng水平
                    精密度差（批內(nèi)CV15-20%）；
                    線性范圍窄（一個數(shù)量級）；
                    存在"HD-HOOK"效應(yīng)。

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