猴子內(nèi)毒素(ET)ELISA檢測(cè)試劑盒

酶標(biāo)（ELISA，EIA）診斷試劑盒操作中出現(xiàn)的問(wèn)題：現(xiàn)象、可能原因和解決辦法

1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.

2、 若不同批號(hào)試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。

3、 加樣時(shí)樣品量誤差，對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大，但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響*，建議校對(duì)加樣器。

4、 反應(yīng)時(shí)間的誤差，做大量標(biāo)本時(shí)，*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。

5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過(guò)程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動(dòng)等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)應(yīng)使用加樣器。

6、 閾值附近實(shí)際上是個(gè)灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽(yáng)性，國(guó)外廠家均要求對(duì)這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準(zhǔn)，如一次陽(yáng)兩次陰zui后判為陰，但實(shí)際上是否為陰不好說(shuō)，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過(guò)一段時(shí)間后再測(cè)。

7、 肉眼觀察稍顯色，酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的，肉眼目測(cè)結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。

8、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽(yáng)性原因多為操作過(guò)程中漏加試劑等有關(guān)。

9、 臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免。可以考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

猴子內(nèi)毒素(ET)ELISA檢測(cè)試劑盒

　封閉

封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程?？乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其zui大的特點(diǎn)是價(jià)廉，可以高濃度使用（5%）。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用，但由于奶粉的成份復(fù)雜，而且封閉后的載體不易*保存，因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。

封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的ELISA固相均需封閉，封閉不當(dāng)反而會(huì)使陰性本底增高。一般說(shuō)來(lái)，雙抗體夾心法，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作時(shí)洗滌*，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí)，因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面，業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測(cè)定中，封閉一般是不可少的（見2.2.2）。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中，在低溫可保存數(shù)月。

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