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豬沙門(mén)氏菌抗體ELISA試劑盒

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豬沙門(mén)氏菌抗體ELISA試劑盒

北京方程生物與豬沙門(mén)氏菌抗體ELISA試劑盒有關(guān)的ELISA知識(shí)之雙抗體夾心法

雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法,操作步驟如下:

1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2) 加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。

  洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3) 加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合

  的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。

4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。

ABS-ELISA法

ABS為親和素(avidin)*(biotin)系統(tǒng)(system)的略語(yǔ)。親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個(gè)分子由4個(gè)能和*結(jié)合的亞基組成。*為小分子化合物,分子量244。用化學(xué)方法制成的衍*-羥基琥珀酰亞胺酯可與蛋白質(zhì)和糖等多種類型的大小分子形成*標(biāo)記產(chǎn)物,標(biāo)記方法頗為簡(jiǎn)便。*與親和素的結(jié)合具有很強(qiáng)的特異性,其親和力較抗原抗體反應(yīng)大得多,兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于一個(gè)親和素可與4個(gè)*分子結(jié)合,因此如把ABS與ELISA法可分為酶標(biāo)記親和素-*(LAB)法和橋聯(lián)親和素-*(ABC)法兩種類型。兩者均以*標(biāo)記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統(tǒng)中的酶標(biāo)抗體(抗原)。在LAB中,固相*先與不標(biāo)記的親和素反應(yīng),然后再加酶標(biāo)記的*以進(jìn)一步提高敏感度。在早期,親和素從蛋清中提取,這種卵親和素為堿性糖蛋白,與聚苯乙烯載體的吸附性很強(qiáng),用于ELISA中可使本底增高。從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素則無(wú)此缺點(diǎn),在ELISA應(yīng)用中有替代前者的趨勢(shì)。由于ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種試劑,增加了操作步驟,在臨床檢驗(yàn)中ABS-ELISA應(yīng)用不多。

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