培養(yǎng)細(xì)胞可不是一件簡(jiǎn)單的事，一不小心就出現(xiàn)污染的情況，捧著被污染的細(xì)胞感嘆∶細(xì)胞真是太難養(yǎng)了。細(xì)胞一旦污染就很難救回來(lái)，更嚴(yán)重的是一個(gè)細(xì)胞的污染可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室內(nèi)細(xì)胞全部受到影響。下面，帶大家了解一下出現(xiàn)污染后的應(yīng)對(duì)方法。

1.細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類(lèi)不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁、黃色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。

解決方法:仔細(xì)檢查器具的滅菌情況，確保通風(fēng)時(shí)間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次s則可能會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存溶液也受到污染。所以一定要注意!下次使用要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生素。

2.支原體污染

支原體是隱藻的污染物，不能通過(guò)過(guò)濾去除。顯微鏡下沒(méi)有任何可見(jiàn)的支原體污染跡象﹐比如細(xì)胞病變和濁度或p值變化《即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中>﹐這樣就會(huì)導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯(cuò)誤的安全感。而在牛血清中，支原體是常見(jiàn)的微生物。

解決方法:通常的過(guò)濾滅菌方法對(duì)支原體沒(méi)有影響。細(xì)胞一旦被支原體污染>特別是對(duì)重要的細(xì)胞系，必須去除支原體，一般的方法有抗生素治療﹑抗血清治療和抗血清與補(bǔ)體聯(lián)合治療。值得注意的是，支原體突出的結(jié)構(gòu)特征是沒(méi)有細(xì)胞壁。因此，它對(duì)作用于細(xì)胞壁的生物合成抗生素(如β-內(nèi)酰胺類(lèi)等>不敏感，并且通常對(duì)多粘菌素和磺胺類(lèi)藥物具有耐藥性。相反，四環(huán)素類(lèi)和大環(huán)內(nèi)噩類(lèi)抗生素對(duì)支原體的抑制作用強(qiáng)，而氨基糖苷類(lèi)的抑制作用較弱。

3.黑點(diǎn)污染

黑色的游動(dòng)點(diǎn)能穿透濾膜并在空氣中擴(kuò)散。它們?cè)诘捅剁R下顯示為黑色圓點(diǎn)，在高倍鏡下顯示為可移動(dòng)的黑色斑點(diǎn)。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點(diǎn)污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，運(yùn)動(dòng)物體無(wú)明顯增加·培養(yǎng)基的顏色和逶明度無(wú)明顯變化·在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類(lèi)似的現(xiàn)象。

解決方法:黑點(diǎn)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)沒(méi)有明顯影響，細(xì)胞增殖后會(huì)自然消失，因此除了血清置換外，無(wú)需特殊處理。如果細(xì)胞可能被小的運(yùn)動(dòng)點(diǎn)污染，建議增加培養(yǎng)皿細(xì)胞密度，以提高細(xì)胞存活率。

4.真菌污染

真菌污染后，培養(yǎng)基一般清激，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀(guān)察到。初，一些真菌類(lèi)似于死細(xì)胞碎片，但其中許多清晰可見(jiàn)，看起來(lái)像珊瑚>比較容易區(qū)分。此外，它們會(huì)慢慢長(zhǎng)出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲，因?yàn)樗鼈兩L(zhǎng)得比較慢，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基禎污染s它們將很難存活。

解決方法:一旦被真菌污染，果斷丟棄，然后對(duì)細(xì)胞房、CO2培養(yǎng)箱、器皿和培養(yǎng)基進(jìn)行消毒。