乙醛酸循環(huán)系列_異檸檬酸裂解酶(ICL)測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發(fā)過程中，通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。
測定原理：
ICL 催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，監(jiān)測 340nm 吸光度的減小速率可間接反應(yīng) ICL 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：液體 360μL×1 支，4℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；
乙醛酸循環(huán)系列_異檸檬酸裂解酶(ICL)測試盒
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定
（1）工作液的配置，將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混合溶解，置于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；（2）在試劑四中加入 4mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
（3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、150μL 工作液和 40μL 試劑四，混勻，立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA
環(huán)保在線