NAD激酶(NADK)測試盒(輔酶Ⅱ系列)
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
測定原理:
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;在340 nm下測定NADPH增加速率??煞从吵鯪ADK活性的大小。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存;
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存;
NAD激酶(NADK)測試盒(輔酶Ⅱ系列)
樣本測定的準備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。