糖代謝系列_葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等動物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖生產(chǎn)中使用GCDH，不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結(jié)合生成的葡萄-糖酸鈣是一種理
想的補鈣制劑。因而，GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。
糖代謝系列_葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒
測定原理：
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下測定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體19 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織的前處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
細菌或培養(yǎng)細胞的前處理：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零；
2、工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑4℃可保存一周；
3、將工作液置于37℃預(yù)熱5分鐘。
4、在1mL石英比色皿中加入10μL樣本和190μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A2-A1。
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