糖代謝系列_ 糖原含量測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖,是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一,主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量,分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度,當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝臟合成糖原,血糖降低時(shí),肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖。因此,肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí),肌糖原不能直接分解成血糖,必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/p>
糖代謝系列_ 糖原含量測(cè)試盒
測(cè)定原理:
蒽酮法。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原,在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶, 4℃保存;
糖原提?。?br/>
1﹑細(xì)胞或細(xì)菌:收集500~1000萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;加入0.75mL提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);轉(zhuǎn)移至10mL試管中,95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測(cè)。
2﹑組織:稱取0.1~0.2g樣品,加入0.75ml提取液充分勻漿;轉(zhuǎn)移至10ml試管中;95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;待組織全部溶解后,取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配制:在試劑二中倒入6mL蒸餾水,緩慢倒入24mL濃硫酸,充分溶解混勻后使用;用不完的試劑4℃保存一周