花青素合成系列_ 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
花青素合成系列_ 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒
測定意義:
查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是個被認(rèn)識的黃酮類化合物合成相關(guān)酶,也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。
測定原理:
查爾酮異構(gòu)酶(CHI)催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮,通過測定 381nm 下的吸光度變化表示 CHI 的活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;用時加入 20mL 試劑一充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存。
粗酶液提?。?br/>
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 381nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測定表
在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10µL 上清液和 190µL 試劑二,立即混勻并記錄 381nm 下初始吸光值 A1 和 37℃保溫 30min 后的吸光值 A2。計算 ΔA=A2-A1。