土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶_土壤系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
C1(EC3.2.1.91)存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi),是纖維素酶系的組份之一,C1催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。
土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶_土壤系列
測定原理:
采用3,5-二硝基水楊酸法測定C1催化微晶纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體60mL×1瓶,4℃保存;
樣品測定的準(zhǔn)備:
稱取約0.1g新鮮土樣或風(fēng)干土樣,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,室溫振蕩提取30min,然后10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
S-C1活性計算:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 6.4078x - 0.0673;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
單位的定義:每g土樣每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.55mL; V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,120 min;W:樣本質(zhì)量,g。