氮代謝系列_硝酸還原酶NR測試盒NADH速率法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
測定原理:
NR 催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;NADH 在 340 nm 有大吸收峰,通過測定 NADH 減少速率來表示 NR 活性。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
氮代謝系列_硝酸還原酶NR測試盒NADH速率法
試劑的組成和配制:
誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
提取液:液體 120mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 10mL×1 瓶,-20℃保存。
試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加 2mL 提取液溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用。
誘導(dǎo)劑應(yīng)用液的配制:用時(shí)將誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液稀釋 10 倍,即取 10mL 誘導(dǎo)劑儲(chǔ)備液加 90mL
蒸餾水,充分混勻。
動(dòng)植物組織樣品的前處理:
(1)取適量誘導(dǎo)劑于燒杯中,將新鮮標(biāo)本洗凈,濾紙吸干,放入誘導(dǎo)劑應(yīng)用液中(淹沒即可),浸泡 2h,取出樣本,濾紙吸干。
(2)按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
注意:
1、 建議使用新鮮沒有冷凍過的樣本。
2、 一般不要誘導(dǎo)處理,預(yù)測定結(jié)果沒有活性(ΔA≤0)則需要誘導(dǎo)處理。