超氧化物歧化酶SOD測試盒(WST-8法)-微量法
測定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
超氧化物歧化酶SOD測試盒(WST-8法)-微量法
測定原理：
通過氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)，O2-可與 WST-8 反應(yīng)產(chǎn)生水溶性染料甲臜，后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃避光保存；
試劑二：液體 150μL×1 支，4℃避光保存；
試劑三：液體 100μL×1 支，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?br/>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 450nm。
2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋 50 倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水 1：49稀釋。
3、 工作液配制：在試劑一加入 100μL 試劑二，充分混勻。配好的試劑 4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照 20mL：0.1mL 的比例混勻配制）
4、 將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。
環(huán)保在線