氧化與抗氧化_CHNO氧化酶XOD測試盒-微量法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
XOD(EC 1.17.3.2)催化CHNO氧化生成尿酸和超氧陰離子,是活性氧主要來源之一;同時也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心,肺,肝臟等組織中,當(dāng)肝功能受損時,XOD大量釋放到血清中,對肝損害的診斷具有特異性的意義。
氧化與抗氧化_CHNO氧化酶XOD測試盒-微量法
測定原理:
XOD催化CHNO產(chǎn)生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?nbsp;
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
操作步驟:
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至290nm,蒸餾水調(diào)零。
2、XOD檢測工作液的配制:用時在每瓶試劑二中加入15mL試劑一,充分混勻,待用;現(xiàn)配現(xiàn)用;
3、測定前將XOD檢測工作液在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
4、準(zhǔn)備96孔UV板一塊(非普通酶標(biāo)板,普通酶標(biāo)板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板)。
5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和250μL工作液,立即混勻并計時,記錄290nm下初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A2-A1。